Presenilin 2 CRISPR Activation Plasmid (h): sc-403532-ACT

PSEN2 kodiert Presenilin 2, eine katalytische Komponente des γ‑Sekretase‑Komplexes, der die intramembranäre Proteolyse mehrerer Typ‑I‑Membranproteine, darunter APP und Notch‑Rezeptoren, vermittelt. Über die γ‑Sekretase‑Aktivität trägt Presenilin 2 zur Notch‑Signalgebung, zur regulierten intramembranären Proteolyse und zu nachgeschalteten Transkriptionsprogrammen bei, die Zellschicksalsentscheidungen steuern. PSEN2 ist zudem mit der Endolysosomen‑ und Mitochondrienbiologie, der Kalziumhomöostase sowie dem Membrantransport verknüpft – Prozesse, die die neuronale Funktion und Stressantworten beeinflussen. Genetische Variation und eine veränderte Funktion von Presenilin 2 werden mit neurodegenerativen Phänotypen in Verbindung gebracht, insbesondere mit Alzheimer‑assoziierten Signalwegen, die die amyloidogene APP‑Prozessierung und die synaptische Integrität betreffen.

Presenilin 2 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen PSEN2-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

Presenilin 2 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des PSEN2-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der PSEN2-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen Presenilin 2-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native PSEN2-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von Presenilin 2-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des Presenilin 2-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem PSEN2-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.