Pre-TCRα Plásmido CRISPR/Cas9 KO (m): sc-422473

Descripción general

Ptcra codifica la cadena alfa del receptor pre–T de ratón (pre‑TCRα), un componente esencial del complejo pre‑TCR expresado en timocitos en desarrollo. La pre‑TCRα se empareja con TCRβ para formar un receptor de señalización que promueve la β‑selección, impulsando la proliferación, la supervivencia y la progresión del estadio doble negativo al doble positivo. La señalización del pre‑TCR activa cascadas de quinasas y programas transcripcionales vinculados a la diferenciación de los timocitos, incluidas vías dependientes de LCK/ZAP70 y la señalización MAPK y PI3K–AKT aguas abajo. La desregulación de los puntos de control asociados a PTCRA puede alterar el desarrollo de las células T y la formación del repertorio, lo que proporciona una vía mecanística para estudiar la inmunodeficiencia y la fisiopatología impulsada por células T en modelos murinos.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO Pre-TCRα (m) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen Ptcra en líneas celulares mouse. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del Ptcra junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de Ptcra tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína Pre-TCRα.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en Ptcra para la investigación de la señalización de Pre-TCRα, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de Ptcra críticos para la función de Pre-TCRα
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de Ptcra para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido Pre-TCRα CRISPR/Cas9 KO (m) y el plásmido Pre-TCRα CRISPR/Cas9 KO (m2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus Ptcra. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR Pre-TCRα (m) y el plásmido HDR Pre-TCRα (m2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología Ptcra para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana Ptcra definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.