Plásmido CRISPR de Activación (h) PRDM15: sc-404932-ACT

PRDM15 (dominio PR/SET 15) codifica un regulador nuclear asociado a la cromatina, implicado en el control transcripcional mediante la modulación de los estados de la cromatina y de la actividad de los promotores. Como miembro de la familia PRDM, PRDM15 se vincula a programas de especificación de linaje y al mantenimiento de la identidad celular al coordinar redes de expresión génica que influyen en la proliferación y la diferenciación. La regulación dependiente de PRDM15 se entrecruza con vías epigenéticas que moldean circuitos transcripcionales del desarrollo y puede afectar programas metabólicos y de señalización. La expresión o actividad desregulada de PRDM15 se ha asociado con una homeostasis transcripcional alterada en contextos relevantes para el cáncer, lo que impulsa su estudio en transcripción oncogénica, estados tipo madre y mapeo de vulnerabilidades epigenéticas.

PRDM15 El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de PRDM15 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

PRDM15 El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus PRDM15 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional PRDM15, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de PRDM15. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo PRDM15 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de PRDM15 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía PRDM15 en células tumorales con expresión de PRDM15 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.