PRAP1 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m): sc-423619

Übersicht

Prolinreiches saures Protein 1 (PRAP1), kodiert durch das Mausgen *Prap1*, ist ein epithelialassoziierter Faktor, der in Geweben des Gastrointestinaltrakts angereichert ist und mit zellulären Reaktionen auf luminalen Stress in Verbindung steht. Die PRAP1-Expression wird durch Entzündungs- und Wachstumsfaktorsignale reguliert, einschließlich Signalwegen downstream von STAT sowie Netzwerken nukleärer Rezeptoren, die die Funktion der mukosalen Barriere prägen. Zu den beschriebenen Aufgaben zählen die Modulation von Programmen für das Überleben, die Differenzierung und die Regeneration des Epithels während Gewebeschädigung und -reparatur. Eine Fehlregulation von PRAP1 wurde mit einer veränderten intestinalen Homöostase und entzündungsassoziierten Krankheitskontexten in Zusammenhang gebracht, was PRAP1 für die Untersuchung von Mechanismen nützlich macht, die die Anpassung des Epithels an Stress mit der Integrität der Barriere verknüpfen.

Das PRAP1 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des Prap1-Gens in mouse-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des Prap1-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von Prap1 nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die PRAP1-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von Prap1-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der PRAP1-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf Prap1-Exone abzielen, die für die PRAP1-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere Prap1-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom PRAP1 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) und vom PRAP1 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des Prap1-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das PRAP1 HDR-Plasmid (m) und PRAP1 HDR-Plasmid (m2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von Prap1-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten Prap1-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.