PQLC1 Plásmido CRISPR/Cas9 KO (h): sc-413347

Descripción general

PQLC1 codifica un transportador de membrana lisosomal implicado en la salida (eflujo) de aminoácidos catiónicos desde la luz lisosomal hacia el citosol, conectando el reciclaje de aminoácidos en el lisosoma con una homeostasis metabólica celular más amplia. Al influir en la detección de nutrientes dependiente del lisosoma y en la exportación lisosomal de aminoácidos básicos, PQLC1 puede modular vías relacionadas con la autofagia, la proteostasis y la adaptación al estrés. Las alteraciones en el transporte lisosomal y en el manejo de aminoácidos son características recurrentes de la neurodegeneración, el metabolismo del cáncer y los trastornos hereditarios relacionados con el lisosoma, lo que convierte a PQLC1 en un nodo útil para estudios mecanísticos. La perturbación funcional de PQLC1 ayuda a dilucidar cómo el transporte de solutos lisosomales se integra con redes de señalización que responden a la disponibilidad de nutrientes.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO PQLC1 (h) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen PQLC1 en líneas celulares human. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del PQLC1 junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de PQLC1 tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína PQLC1.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en PQLC1 para la investigación de la señalización de PQLC1, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de PQLC1 críticos para la función de PQLC1
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de PQLC1 para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido PQLC1 CRISPR/Cas9 KO (h) y el plásmido PQLC1 CRISPR/Cas9 KO (h2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus PQLC1. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR PQLC1 (h) y el plásmido HDR PQLC1 (h2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología PQLC1 para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana PQLC1 definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.