Plásmido CRISPR de Activación (h) PPP1R26: sc-411368-ACT

PPP1R26 codifica una proteína reguladora que se asocia a complejos de la fosfatasa de proteínas 1 (PP1), ayudando a dirigir la actividad fosfatasa hacia sustratos específicos y compartimentos subcelulares concretos. Mediante la modulación de la desfosforilación de serina/treonina, PPP1R26 está en posición de influir en programas dependientes de la fosforilación, incluidos la progresión del ciclo celular, procesos asociados a la cromatina y el control transcripcional. La alteración de las redes reguladoras de PP1 puede remodelar la fidelidad de la señalización y la proteostasis, lo que hace a PPP1R26 relevante para estudios de la desregulación de la fosforilación observada en diversos contextos patológicos. Sus patrones de expresión y su dinámica de interacción ofrecen una herramienta útil para analizar cómo el direccionamiento de PP1 contribuye a transiciones del estado celular.

PPP1R26 El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de PPP1R26 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

PPP1R26 El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus PPP1R26 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional PPP1R26, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de PPP1R26. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo PPP1R26 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de PPP1R26 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía PPP1R26 en células tumorales con expresión de PPP1R26 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.