Plásmido CRISPR de Activación (h) PPP1R15B: sc-408988-ACT

PPP1R15B (también conocido como CReP) codifica una subunidad reguladora que dirige la fosfatasa de proteínas 1 (PP1) para desfosforilar eIF2α, actuando como un contrapeso clave a la represión traduccional inducida por el estrés. Al promover la desfosforilación de eIF2α, PPP1R15B ayuda a restablecer la síntesis global de proteínas tras perturbaciones y modula la señalización de la respuesta integrada al estrés (ISR), que se cruza con el estrés del RE, la proteostasis y programas de supervivencia celular. Este control dirigido por PP1 influye en vías posteriores de adaptación transcripcional y metabólica gobernadas por redes dependientes de ATF4/CHOP. La desregulación de la dinámica de fosforilación de eIF2α y del ajuste fino de la ISR se ha implicado en diversos contextos, como la neurodegeneración, el estrés metabólico y la adaptación de células cancerosas, lo que convierte a PPP1R15B en un nodo útil para estudios mecanísticos de la resiliencia al estrés.

PPP1R15B El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de PPP1R15B sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

PPP1R15B El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus PPP1R15B en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional PPP1R15B, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de PPP1R15B. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo PPP1R15B y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de PPP1R15B en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía PPP1R15B en células tumorales con expresión de PPP1R15B silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.