Partículas Lentivirales de Activación (h) PPP1R12C: sc-412332-LAC

PPP1R12C codifica la subunidad 3 de direccionamiento de la fosfatasa de miosina (MYPT3), un componente regulador de la proteína fosfatasa 1 que ayuda a orientar la actividad catalítica de PP1 hacia sustratos del citoesqueleto. Al controlar los estados de fosforilación de la cadena ligera de miosina y de reguladores relacionados del complejo actomiosina, PPP1R12C contribuye a la contractilidad celular, la dinámica de adhesión y la motilidad, integrando señales de RhoA/ROCK y de otras vías de quinasas. La alteración del direccionamiento de PP1 y de la función de la fosfatasa de miosina puede perturbar la remodelación del citoesqueleto y la mecanotransducción, procesos frecuentemente implicados en la invasión tumoral, la remodelación asociada a fibrosis y la disfunción del músculo liso vascular. Por lo tanto, la expresión de PPP1R12C y su regulación dependiente de la fosforilación son relevantes para estudios sobre la organización de fibras de estrés, el control de la forma celular y la comunicación cruzada de señales que ajusta fenotipos contráctiles.

Las partículas de activación lentiviral PPP1R12C (h) responden a esta necesidad al empaquetar el sistema completo de activación transcripcional del mediador de activación sinérgica (SAM) en partículas lentivirales de alto título listas para la transducción, lo que permite una regulación al alza eficiente de PPP1R12C en una gama más amplia de tipos de células humanas.

Las partículas de activación lentiviral PPP1R12C (h) suministran todos los componentes funcionales del sistema mediador de activación sinérgica (SAM) a través de la transducción lentiviral. El sistema comprende tres preparaciones de partículas cotransducidas en las células diana: una que codifica dCas9 catalíticamente inactivo (mutaciones D10A y N863A) fusionado al dominio de transactivación VP64 con un gen de resistencia a la blasticidina; otra que codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1 con un gen de resistencia a la higromicina; y otra que codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 con un gen de resistencia a la puromicina. Tras la transducción lentiviral y la integración genómica de los casetes de expresión, los componentes del SAM se expresan de forma estable y se ensamblan en el locus diana dentro de la región promotora proximal, aguas arriba del sitio de inicio de la transcripción PPP1R12C, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma cooperativa para reclutar la maquinaria transcripcional endógena e impulsar la regulación al alza sostenida de la expresión endógena de PPP1R12C. El uso de dCas9 inactivo frente a nucleasas evita la introducción de roturas de ADN de doble cadena y preserva el locus genómico nativo PPP1R12C y la arquitectura reguladora.

El formato lentiviral ofrece varias ventajas prácticas: la integración genómica estable permite la activación hereditaria a lo largo de las divisiones celulares; las preparaciones de partículas de alto título eliminan la necesidad de producir el virus internamente; y la compatibilidad con tipos de células primarias, no divisibles y resistentes a la transfección amplía la accesibilidad experimental. La transducción exitosa puede confirmarse y enriquecerse mediante selección con triple antibiótico utilizando puromicina, higromicina y blasticidina.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.