PPM1H Plásmido CRISPR/Cas9 KO (m): sc-435618

Descripción general

Ppm1h codifica PPM1H, una fosfatasa de serina/treonina de la familia PP2C dependiente de Mg2+/Mn2+ que modula la salida de señalización al desfosforilar proteínas diana implicadas en las respuestas celulares al estrés y en el control del crecimiento. Mediante la atenuación de vías de quinasas impulsada por su actividad fosfatasa, PPM1H contribuye a la regulación de la homeostasis de fosforilación, lo que influye en la progresión del ciclo celular, la supervivencia y los programas de diferenciación. En sistemas murinos, PPM1H se ha utilizado para investigar cómo la actividad fosfatasa moldea la dinámica de las vías y fenotipos específicos de tejido, aportando vínculos mecanísticos entre redes de fosforilación alteradas y rasgos complejos. La señalización fosfatasa desregulada es ampliamente relevante para modelos de señalización oncogénica, inflamación y neurobiología, lo que convierte a Ppm1h en un nodo útil para estudiar el reconfigurado de vías y las relaciones genotipo–fenotipo.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO PPM1H (m) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen Ppm1h en líneas celulares mouse. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del Ppm1h junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de Ppm1h tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína PPM1H.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en Ppm1h para la investigación de la señalización de PPM1H, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de Ppm1h críticos para la función de PPM1H
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de Ppm1h para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido PPM1H CRISPR/Cas9 KO (m) y el plásmido PPM1H CRISPR/Cas9 KO (m2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus Ppm1h. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR PPM1H (m) y el plásmido HDR PPM1H (m2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología Ppm1h para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana Ppm1h definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.