Partículas Lentivirales de Activación (h) PPARγ: sc-400030-LAC

PPARG codifica el receptor gamma activado por proliferadores de peroxisomas (PPARγ), un receptor nuclear activado por ligando que forma heterodímeros con RXR para regular la transcripción en elementos de respuesta a PPAR. PPARγ es un regulador central de la adipogénesis, la captación y el almacenamiento de lípidos, la homeostasis de la glucosa y los programas transcripcionales antiinflamatorios, integrando señales procedentes de ácidos grasos y eicosanoides. Modula vías metabólicas e inmunitarias, incluidas la señalización de la insulina, el metabolismo de ácidos grasos y la polarización de macrófagos, con efectos amplios sobre la diferenciación celular y el equilibrio energético. La desregulación de la actividad de PPARG se ha implicado en rasgos del síndrome metabólico, la resistencia a la insulina, la biología de la enfermedad del hígado graso no alcohólico y la inflamación asociada al microambiente tumoral, lo que lo convierte en un nodo ampliamente estudiado en la investigación de la inmunometabolismo y el metabolismo del cáncer.

Las partículas de activación lentiviral PPARγ (h) responden a esta necesidad al empaquetar el sistema completo de activación transcripcional del mediador de activación sinérgica (SAM) en partículas lentivirales de alto título listas para la transducción, lo que permite una regulación al alza eficiente de PPARG en una gama más amplia de tipos de células humanas.

Las partículas de activación lentiviral PPARγ (h) suministran todos los componentes funcionales del sistema mediador de activación sinérgica (SAM) a través de la transducción lentiviral. El sistema comprende tres preparaciones de partículas cotransducidas en las células diana: una que codifica dCas9 catalíticamente inactivo (mutaciones D10A y N863A) fusionado al dominio de transactivación VP64 con un gen de resistencia a la blasticidina; otra que codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1 con un gen de resistencia a la higromicina; y otra que codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 con un gen de resistencia a la puromicina. Tras la transducción lentiviral y la integración genómica de los casetes de expresión, los componentes del SAM se expresan de forma estable y se ensamblan en el locus diana dentro de la región promotora proximal, aguas arriba del sitio de inicio de la transcripción PPARG, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma cooperativa para reclutar la maquinaria transcripcional endógena e impulsar la regulación al alza sostenida de la expresión endógena de PPARγ. El uso de dCas9 inactivo frente a nucleasas evita la introducción de roturas de ADN de doble cadena y preserva el locus genómico nativo PPARG y la arquitectura reguladora.

El formato lentiviral ofrece varias ventajas prácticas: la integración genómica estable permite la activación hereditaria a lo largo de las divisiones celulares; las preparaciones de partículas de alto título eliminan la necesidad de producir el virus internamente; y la compatibilidad con tipos de células primarias, no divisibles y resistentes a la transfección amplía la accesibilidad experimental. La transducción exitosa puede confirmarse y enriquecerse mediante selección con triple antibiótico utilizando puromicina, higromicina y blasticidina.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.