PPARβ Double Nickase Plasmid (h): sc-400523-NIC
- Zielspezies: human
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das PPARβ Double Nickase Plasmid (h) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- PPARβ Double-Nickase-Plasmid (h) und PPARβ Double-Nickase-Plasmid (h2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf PPARD abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
- Nach der Transfektion kann die Effizienz des Gen-Knockouts per Western Blot oder histologisch mit folgendem Antikörper überprüft werden: PPARβ: sc-74517
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
PPARβ Double Nickase Plasmid (h) | sc-400523-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
PPARβ Double Nickase Plasmid (h2) | sc-400523-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
PPARD kodiert den Peroxisomen-Proliferator-aktivierten Rezeptor Beta/Delta (PPARβ), einen ligandaktivierten nukleären Rezeptor, der mit RXR ein Heterodimer bildet, um Transkriptionsprogramme zu regulieren, die die Lipidverwertung, die Fettsäureoxidation und die Energiehomöostase steuern. PPARβ integriert metabolische und inflammatorische Signale, um über die PPAR-Signalgebung und breitere nukleäre Rezeptor-Transkriptionsnetzwerke die mitochondriale Funktion, Reaktionen auf oxidativen Stress und Entscheidungen über das Zellschicksal zu koordinieren. In vielen Zelltypen beeinflusst die PPARD-Aktivität den Glukose- und Lipidstoffwechsel sowie die zytokinresponsive Genexpression und ist damit mit Mechanismen verknüpft, die metabolischer Dysregulation und entzündungsassoziierten Phänotypen zugrunde liegen. Veränderte PPARD/PPARβ-Signalgebung wurde u. a. im Kontext von Dyslipidämie, Insulinresistenz und Tumorbiologie untersucht, wo eine transkriptionelle Umprogrammierung Proliferation, Differenzierung und Interaktionen mit dem Mikromilieu beeinflussen kann.
PPARβ Das Double-Nickase-Plasmid (h) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des PPARD-Lokus in human-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von PPARD abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die PPARD-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit PPARD-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.