Plasmide CRISPR d'Activation (h) PP2Cγ: sc-404206-ACT

PPM1G code la phosphatase protéique sérine/thréonine PP2Cγ, une enzyme de la famille PP2C qui régule les voies de signalisation dépendantes de la phosphorylation ainsi que des processus nucléaires. PP2Cγ a été associée au contrôle de programmes d’expression génique via ses effets sur des facteurs liés à la chromatine, la maturation/traitement des ARN et des réseaux de phosphorylation impliqués dans le cycle cellulaire, contribuant à ajuster les réponses au stress et la prolifération. En contrebalançant l’activité des kinases, PPM1G participe au maintien de l’homéostasie des protéines phosphorylées, ce qui influence l’intégrité du génome et les sorties transcriptionnelles. Une dérégulation des voies associées à PP2Cγ a été observée dans des contextes pertinents pour la signalisation oncogénique, les réponses aux dommages de l’ADN et des transitions aberrantes d’état cellulaire, ce qui en fait un nœud utile pour des études mécanistiques.

PP2Cγ Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de PPM1G sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

PP2Cγ Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus PPM1G dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription PPM1G, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de PP2Cγ. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus PPM1G natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de PP2Cγ au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie PP2Cγ dans les cellules tumorales présentant une expression de PPM1G silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.