Not CRISPR data: the image illustrates antibody quality for visualizing CRISPR experiment results.
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PP2Cα Plásmido CRISPR/Cas9 KO (m): sc-422374
- Especies Diana: mouse
- 20 µg de plásmido de ADN purificado listo para la trasfección; suficiente para 20 transfecciones máximo
- PP2Cα El plásmido CRISPR/Cas9 Knockout (KO) (m) es un conjunto de plásmidos, cada uno de los cuales codifica la nucleasa Cas9 y un ARN guía (gRNA) de 20 nt específico para el objetivo, diseñado para lograr la máxima eficiencia de knockout utilizando secuencias derivadas de la biblioteca GeCKO v2
- Las secuencias de gRNA dirigen a Cas9 para que induzca roturas de doble cadena (DSB) específicas en el locus genómico PP2Cα, lo que da lugar a la inactivación del gen mediante unión de extremos no homólogos (NHEJ)
- Los genes de resistencia a la puromicina y RFP están flanqueados por sitios LoxP, lo que permite la eliminación de los marcadores de selección mediante la recombinasa Cre (Vector Cre: sc-418923) tras el establecimiento de líneas celulares knockout estables
- Tras la transfección, la eficacia del knockout puede comprobarse mediante WB, IF ó IHC utilzando el anticuerpo: PP2Cα Anticuerpo (7F12): sc-517264
Información sobre pedidos
| Nombre del producto | Número de catálogo | UNIDAD | Precio | CANTIDAD | Favoritos | |
PP2Cα Plásmido CRISPR/Cas9 KO (m) | sc-422374 | 20 µg | $397.00 |
Descripción general
Ppm1a codifica la proteína fosfatasa 2C alfa (PP2Cα), una fosfatasa de serina/treonina dependiente de Mg2+/Mn2+ que actúa como regulador negativo de la señalización activada por estrés. PP2Cα modula las vías MAPK, incluidas las cascadas de p38 y JNK, al desfosforilar quinasas clave y dar forma a programas transcripcionales posteriores que gobiernan la inflamación, la apoptosis y el control del ciclo celular. También interactúa con las respuestas al daño del ADN y al estrés metabólico, ayudando a ajustar la duración y la amplitud de la señal en respuesta a señales ambientales. La actividad desregulada de PP2Cα se ha asociado con una señalización de estrés aberrante y fenotipos oncogénicos, lo que respalda su estudio en biología tumoral, regulación inmunitaria y homeostasis celular.
El plásmido CRISPR/Cas9 KO PP2Cα (m) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen Ppm1a en líneas celulares mouse. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del Ppm1a junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.
El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de Ppm1a tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína PP2Cα.
Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en Ppm1a para la investigación de la señalización de PP2Cα, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.
Características principales
- sgRNA dirigidos a los exones de Ppm1a críticos para la función de PP2Cα
Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de Ppm1a para mejorar la eficiencia del knockout
Compatible con la administración mediante transfección
Variantes de diseño
CRISPRs +/- HDRs
- Los gRNA codificados por el plásmido PP2Cα CRISPR/Cas9 KO (m) y el plásmido PP2Cα CRISPR/Cas9 KO (m2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus Ppm1a. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR PP2Cα (m) y el plásmido HDR PP2Cα (m2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología Ppm1a para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana Ppm1a definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.