PP2B-Aβ Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-402853-ACT

PPP3CB codifica a subunidade catalítica beta da calcineurina (PP2B-Aβ), uma fosfatase de serina/treonina dependente de Ca2+/calmodulina que acopla sinais intracelulares de cálcio a respostas transcricionais e pós-traducionais. A calcineurina desfosforila fatores de transcrição da família NFAT para regular programas gênicos envolvidos na sinalização imune, na plasticidade sináptica e na adaptação ao estresse celular, e também interage com vias de MAPK, Wnt e remodelamento do citoesqueleto. A atividade desregulada de PPP3CB tem sido associada a alterações na excitabilidade neuronal e a fenótipos do neurodesenvolvimento, e a sinalização aberrante da calcineurina é estudada em inflamação, hipertrofia de cardiomiócitos e transições de estado celular em câncer. Como um nó central na sinalização dependente de cálcio, a PP2B-Aβ oferece uma abordagem acessível para dissecar circuitos transcricionais dependentes de sinal e redes reguladas por fosfatases.

PP2B-Aβ O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de PPP3CB sem alterar a sequência de ADN subjacente.

PP2B-Aβ O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus PPP3CB em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição PPP3CB, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de PP2B-Aβ. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus PPP3CB nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de PP2B-Aβ no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via PP2B-Aβ em células tumorais com expressão de PPP3CB silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.