PP2B-Aα Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (m): sc-422383
- alvos específicos: mouse
- 20 µg de plasmídeo de DNA pronto para transfecção; Suficiente para até 20 transfecções
- PP2B-Aα O Plasmídeo CRISPR/Cas9 Knockout (KO) (m) é um conjunto de plasmídeos, cada um codificando a nuclease Cas9 e um RNA guia (gRNA) de 20 nt específico para o alvo, concebido para uma eficiência máxima de knockout utilizando sequências derivadas da biblioteca GeCKO v2
- As sequências de gRNA direcionam a Cas9 para induzir quebras de cadeia dupla (DSBs) específicas do local no locus genómico PP2B-Aα, resultando no knockout do gene através da junção de extremidades não homólogas (NHEJ)
- Os genes de resistência à puromicina e RFP são flanqueados por sítios LoxP, permitindo a remoção de marcadores de seleção através da recombinase Cre (Cre Vector: sc-418923) após o estabelecimento de linhas celulares knockout estáveis
- Após a transfecção, a eficácia do processo de nocaute genético por ser testada WB, IF ou IHC usando o anticorpo:PP2B-Aα Anticorpo (D-9): sc-17808
Informacoes sobre ordens
| Nome do Produto | Numero de Catalogo | UNID | Preco | Qde | FAVORITOS | |
PP2B-Aα Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (m) | sc-422383 | 20 µg | $397.00 |
Visão geral
Ppp3ca codifica a subunidade catalítica Aα da fosfatase proteica 2B (PP2B-Aα/calcineurina), uma fosfatase de serina/treonina dependente de Ca²⁺/calmodulina que acopla sinais intracelulares de cálcio a programas transcricionais e do citoesqueleto. Em células de camundongo, a calcineurina desfosforila substratos-chave, como os fatores de transcrição NFAT, moldando a expressão gênica dependente de cálcio, a sinalização imune e processos neuronais dependentes de atividade, incluindo a plasticidade sináptica. A PP2B-Aα participa de vias que controlam a regulação de canais iônicos, a adaptação mitocondrial e metabólica e redes de sinalização responsivas ao estresse. A atividade desregulada da calcineurina tem sido associada, em modelos experimentais, a alterações na ativação de células imunes, a fenótipos do neurodesenvolvimento e neurodegenerativos e a remodelamento cardíaco e de músculo esquelético mal-adaptativo.
O Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO PP2B-Aα (m) é um conjunto de plasmídeos concebido para a interrupção direcionada do gene Ppp3ca em linhas celulares mouse. Cada plasmídeo coexpressa um RNA guia único (sgRNA) direcionado a um local distinto dentro do Ppp3ca, juntamente com a nuclease Cas9 de Streptococcus pyogenes. Os plasmídeos também codificam GFP, permitindo a identificação fluorescente e o enriquecimento de células transfectadas com sucesso por microscopia de fluorescência ou citometria de fluxo.
O design multiguia aumenta a probabilidade de gerar inserções ou deleções (indels) que interrompem o quadro de leitura aberto do Ppp3ca na sequência da formação de quebras de cadeia dupla mediadas por Cas9. As quebras de ADN introduzidas pelo sistema CRISPR/Cas9 são reparadas através de vias endógenas de junção de extremidades não homólogas (NHEJ), resultando frequentemente em mutações de deslocamento de quadro que abolir a expressão da proteína PP2B-Aα.
Este sistema de knockout CRISPR permite a geração eficiente de modelos celulares com deficiência de Ppp3ca para a investigação da sinalização de PP2B-Aα, estudos de genómica funcional, investigação em biologia do cancro e avaliação de respostas terapêuticas em linhas celulares humanas.
Características principais
- sgRNAs direcionados para o(s) exão(ões) Ppp3ca críticos para a função PP2B-Aα
Coexpressão de SpCas9 e sgRNA a partir de um único plasmídeo para simplificar a administração
Repórter GFP para identificação de células transfectadas
Conjunto de plasmídeos direcionados para múltiplos locais genómicos Ppp3ca para melhorar a eficiência do knockout
Compatível com administração por transfecção
Variantes de Design
CRISPRs +/- HDRs
- Os gRNAs codificados pelo PP2B-Aα Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (m) e pelo PP2B-Aα Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (m2) têm como alvo locais distintos dentro do locus Ppp3ca. Pode estar disponível um ou ambos os designs de alvo. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.
As construções doadoras HDR codificadas pelo PP2B-Aα Plasmídeo HDR (m) e o Plasmídeo HDR PP2B-Aα (m2) contêm uma cassete de resistência à puromicina e um repórter RFP flanqueado por braços de homologia Ppp3ca para suportar a reparação dirigida por homologia em locais-alvo Ppp3ca definidos, correspondentes aos desenhos de KO CRISPR/Cas9. A disponibilidade do doador HDR pode variar. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.
Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.