PP2B-Aα Plasmide KO CRISPR/Cas9 (m): sc-422383
- Specie Target: mouse
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- PP2B-Aα Il plasmide CRISPR/Cas9 Knockout (KO) (m) è un pool di plasmidi, ciascuno dei quali codifica la nucleasi Cas9 e un RNA guida (gRNA) specifico per il bersaglio di 20 nt, progettato per la massima efficienza di knockout utilizzando sequenze derivate dalla libreria GeCKO v2
- Le sequenze gRNA indirizzano Cas9 a indurre rotture a doppio filamento (DSB) sito-specifiche nel locus genomico PP2B-Aα, con conseguente knockout genico tramite giunzione non omologa (NHEJ)
- I geni di resistenza alla puromicina e RFP sono fiancheggiati da siti LoxP, consentendo la rimozione dei marcatori di selezione tramite la ricombinasi Cre (Cre Vector: sc-418923) dopo aver stabilito linee cellulari knockout stabili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: PP2B-Aα Antibody (D-9): sc-17808
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
PP2B-Aα Plasmide KO CRISPR/Cas9 (m) | sc-422383 | 20 µg | $397.00 |
Panoramica
Ppp3ca codifica la subunità catalitica Aα della fosfatasi proteica 2B (PP2B-Aα/calcineurina), una fosfatasi serina/treonina Ca²⁺/calmodulina-dipendente che collega i segnali intracellulari del calcio a programmi trascrizionali e del citoscheletro. Nelle cellule di topo, la calcineurina defosforila substrati chiave come i fattori di trascrizione NFAT, modulando l’espressione genica calcio-dipendente, la segnalazione immunitaria e processi neuronali dipendenti dall’attività, inclusa la plasticità sinaptica. PP2B-Aα partecipa a vie che controllano la regolazione dei canali ionici, l’adattamento mitocondriale e metabolico e reti di segnalazione responsiva allo stress. Un’attività deregolata della calcineurina è stata associata, in modelli sperimentali, ad alterazioni dell’attivazione delle cellule immunitarie, a fenotipi neuroevolutivi e neurodegenerativi e a un rimodellamento maladattivo del muscolo cardiaco e scheletrico.
Il plasmide CRISPR/Cas9 KO PP2B-Aα (m) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene Ppp3ca in linee cellulari mouse. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del Ppp3ca insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.
Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto Ppp3ca a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina PP2B-Aα.
Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di Ppp3ca per lo studio della segnalazione di PP2B-Aα, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.
Caratteristiche principali
- sgRNA mirati agli esoni Ppp3ca critici per la funzione di PP2B-Aα
Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di Ppp3ca per migliorare l'efficienza del knockout
Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione
Varianti di progettazione
CRISPR +/- HDR
- Gli gRNA codificati dal PP2B-Aα CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m) e dal PP2B-Aα CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus Ppp3ca. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
I costrutti donatori HDR codificati dal PP2B-Aα Plasmide HDR (m) e il plasmide HDR PP2B-Aα (m2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia Ppp3ca per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio Ppp3ca definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.