Not CRISPR data: the image illustrates antibody quality for visualizing CRISPR experiment results.
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PP2A-Cβ Plásmido CRISPR/Cas9 KO (h): sc-400937
- Especies Diana: human
- 20 µg de plásmido de ADN purificado listo para la trasfección; suficiente para 20 transfecciones máximo
- PP2A-Cβ El plásmido CRISPR/Cas9 Knockout (KO) (h) es un conjunto de plásmidos, cada uno de los cuales codifica la nucleasa Cas9 y un ARN guía (gRNA) de 20 nt específico para el objetivo, diseñado para lograr la máxima eficiencia de knockout utilizando secuencias derivadas de la biblioteca GeCKO v2
- Las secuencias de gRNA dirigen a Cas9 para que induzca roturas de doble cadena (DSB) específicas en el locus genómico PP2A-Cβ, lo que da lugar a la inactivación del gen mediante unión de extremos no homólogos (NHEJ)
- Los genes de resistencia a la puromicina y RFP están flanqueados por sitios LoxP, lo que permite la eliminación de los marcadores de selección mediante la recombinasa Cre (Vector Cre: sc-418923) tras el establecimiento de líneas celulares knockout estables
- Tras la transfección, la eficacia del knockout puede comprobarse mediante WB, IF ó IHC utilzando el anticuerpo: PP2A-Cα/β Anticuerpo (1D6): sc-80665
Información sobre pedidos
| Nombre del producto | Número de catálogo | UNIDAD | Precio | CANTIDAD | Favoritos | |
PP2A-Cβ Plásmido CRISPR/Cas9 KO (h) | sc-400937 | 20 µg | $397.00 |
Descripción general
PPP2CB codifica la subunidad catalítica beta de la fosfatasa de proteínas 2A (PP2A-Cβ), una importante fosfatasa de serina/treonina que forma holoenzimas heterotriméricas de PP2A con diversas subunidades reguladoras B para controlar la especificidad de sustrato y la localización subcelular. PP2A-Cβ contrarresta la señalización de quinasas al desfosforilar nodos clave en vías que regulan la progresión del ciclo celular, las respuestas al daño en el ADN y la señalización de estrés, incluidas AKT/MAPK y múltiples reguladores mitóticos. A través de estas actividades, PP2A ayuda a mantener la homeostasis de fosforilación, afectando programas transcripcionales, la dinámica del citoesqueleto y el control metabólico. La señalización desregulada de PP2A y la expresión o regulación alteradas de PPP2CB se han vinculado con una proliferación anómala y con señales de supervivencia, con relevancia para estudios en oncología y en neurobiología centrados en redes de señalización dependientes de fosfatasas.
El plásmido CRISPR/Cas9 KO PP2A-Cβ (h) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen PPP2CB en líneas celulares human. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del PPP2CB junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.
El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de PPP2CB tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína PP2A-Cβ.
Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en PPP2CB para la investigación de la señalización de PP2A-Cβ, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.
Características principales
- sgRNA dirigidos a los exones de PPP2CB críticos para la función de PP2A-Cβ
Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de PPP2CB para mejorar la eficiencia del knockout
Compatible con la administración mediante transfección
Variantes de diseño
CRISPRs +/- HDRs
- Los gRNA codificados por el plásmido PP2A-Cβ CRISPR/Cas9 KO (h) y el plásmido PP2A-Cβ CRISPR/Cas9 KO (h2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus PPP2CB. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR PP2A-Cβ (h) y el plásmido HDR PP2A-Cβ (h2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología PPP2CB para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana PPP2CB definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.