PP2A-Cα Double Nickase Plasmid (h): sc-400613-NIC
- Zielspezies: human
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das PP2A-Cα Double Nickase Plasmid (h) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- PP2A-Cα Double-Nickase-Plasmid (h) und PP2A-Cα Double-Nickase-Plasmid (h2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf PPP2CA abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
- Nach der Transfektion kann die Effizienz des Gen-Knockouts per Western Blot oder histologisch mit folgendem Antikörper überprüft werden: PP2A-Cα/β: sc-80665
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
PP2A-Cα Double Nickase Plasmid (h) | sc-400613-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
PP2A-Cα Double Nickase Plasmid (h2) | sc-400613-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
PPP2CA kodiert die katalytische Cα‑Untereinheit der Proteinphosphatase 2A (PP2A), einer wichtigen Serin/Threonin‑Phosphatase, die heterotrimere Komplexe mit der A‑Gerüstuntereinheit und verschiedenen regulatorischen B‑Untereinheiten bildet, um die Substratspezifität zu steuern. PP2A‑Cα reguliert phosphorylierungsabhängige Signalübertragung in Zellzyklusprogression, DNA‑Schadensantworten und Zytoskelettdynamik und spielt dabei eine zentrale Rolle bei der Modulation der MAPK‑, PI3K/AKT‑ und Wnt/β‑Catenin‑Signalwege. Durch koordinierte Dephosphorylierung zentraler Kinasen und Strukturproteine trägt PPP2CA zur Aufrechterhaltung der Proteostase und der Genauigkeit von Checkpoints bei. Eine fehlregulierte PP2A‑Aktivität und veränderte PPP2CA‑Funktion wurden mit aberranten Phosphorylierungsnetzwerken in mehreren Krebsarten sowie im Kontext neurodegenerativer Erkrankungen in Verbindung gebracht, was PPP2CA als mechanistischen Knotenpunkt für Signalwegstudien unterstützt.
PP2A-Cα Das Double-Nickase-Plasmid (h) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des PPP2CA-Lokus in human-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von PPP2CA abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die PPP2CA-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit PPP2CA-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.