PP2A-Cα CRISPR Activationプラスミド (h): sc-400613-ACT

PPP2CA は、プロテインホスファターゼ2A（PP2A）の触媒Cαサブユニット（PP2A-Cα）をコードしており、これは主要なセリン／スレオニンホスファターゼの一つです。PP2A は、構造サブユニットAおよび調節サブユニットBとヘテロ三量体複合体を形成し、基質特異性や細胞内局在を制御します。PP2A-Cα はキナーゼシグナルと拮抗して、MAPK/ERK、PI3K–AKT、Wnt/β-カテニンなどの経路を介し、細胞周期の進行、DNA損傷応答、細胞骨格ダイナミクス、代謝プログラムを調節します。PP2A ホロ酵素の組成や触媒活性の変動は、がん生物学や神経変性に関連する過程で観察されるリン酸化ネットワークの破綻と関連しています。そのため PPP2CA は、リン酸化恒常性とシグナル伝達の忠実性を担う結節的（ノード）制御因子として広く研究されています。

PP2A-Cα CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性PPP2CAの発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

PP2A-Cα CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における PPP2CA 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はPPP2CA転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性PP2A-Cαの発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のPPP2CA遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるPP2A-Cα依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびPPP2CA発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるPP2A-Cα経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。