PP2A-Aβ Plasmide KO CRISPR/Cas9 (m): sc-428621

Panoramica

Ppp2r1b codifica la subunità di impalcatura PP2A-Aβ della fosfatasi proteica 2A (PP2A), un complesso fosfatasico serina/treonina fondamentale che organizza le subunità catalitiche e regolatorie per controllare la specificità di substrato e la localizzazione. La segnalazione mediata da PP2A modella processi dipendenti dalla fosforilazione, tra cui la progressione del ciclo cellulare, le risposte al danno al DNA, la dinamica del citoscheletro e la modulazione delle vie MAPK/AKT. Regolando finemente gli eventi di defosforilazione in molteplici reti, PP2A-Aβ influenza l’omeostasi cellulare e l’adattamento allo stress in diversi tessuti. La deregolazione delle subunità di PP2A, comprese quelle di impalcatura, è stata associata ad alterazioni della segnalazione proliferativa e della stabilità genomica, a supporto della sua rilevanza negli studi meccanicistici di stati di segnalazione associati a patologie.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO PP2A-Aβ (m) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene Ppp2r1b in linee cellulari mouse. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del Ppp2r1b insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto Ppp2r1b a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina PP2A-Aβ.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di Ppp2r1b per lo studio della segnalazione di PP2A-Aβ, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni Ppp2r1b critici per la funzione di PP2A-Aβ
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di Ppp2r1b per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal PP2A-Aβ CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m) e dal PP2A-Aβ CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus Ppp2r1b. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal PP2A-Aβ Plasmide HDR (m) e il plasmide HDR PP2A-Aβ (m2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia Ppp2r1b per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio Ppp2r1b definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.