PP2A-Aβ CRISPR Activationプラスミド (h): sc-403081-ACT

PPP2R1Bは、PP2A-Aβ足場サブユニットをコードしており、セリン／スレオニン脱リン酸化を担うタンパク質ホスファターゼ2A（PP2A）複合体における中核構成要素です。PP2A複合体では、触媒サブユニットと制御サブユニットが組織化されて機能しますが、PP2A-Aβはホロ酵素の組み立てを規定することで、細胞周期の進行、DNA損傷応答、細胞骨格動態を制御するシグナル伝達ネットワークに影響を与えます。その下流では、MAPK、AKT、Wnt/β-カテニン関連のリン酸化状態にも影響が及びます。PP2Aの足場機能が変化すると、ホスファターゼシグナルのバランスが乱れ得て、がんに関連する状況において増殖制御の破綻やゲノム不安定性と結び付けられてきました。そのためPPP2R1Bは、ヒト細胞におけるリン酸化プロテオームの恒常性維持や経路間クロストークにおける役割の観点から、頻繁に研究されています。

PP2A-Aβ CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性PPP2R1Bの発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

PP2A-Aβ CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における PPP2R1B 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はPPP2R1B転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性PP2A-Aβの発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のPPP2R1B遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるPP2A-Aβ依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびPPP2R1B発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるPP2A-Aβ経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。