Nicht CRISPR-Daten: Das Bild veranschaulicht die Qualität von Antikörpern zur Visualisierung von CRISPR-Experimentergebnissen.
Nicht CRISPR-Daten: Das Bild veranschaulicht die Qualität von Antikörpern zur Visualisierung von CRISPR-Experimentergebnissen.
PP1γ CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h): sc-401476
- Zielspezies: human
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- PP1γ Das CRISPR/Cas9-Knockout (KO)-Plasmid (h) ist ein Pool von Plasmiden, von denen jedes für die Cas9-Nuklease und eine zielspezifische 20-nt-Guide-RNA (gRNA) kodiert, die für maximale Knockout-Effizienz unter Verwendung von Sequenzen aus der GeCKO v2-Bibliothek entwickelt wurde
- gRNA-Sequenzen lenken Cas9 so, dass es ortsspezifische Doppelstrangbrüche (DSBs) im PP1γ-Genomlokus induziert, was zu einem Gen-Knockout durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ) führt
- Die Puromycin-Resistenz- und RFP-Gene werden von LoxP-Stellen flankiert, was die Entfernung der Selektionsmarker mittels Cre-Rekombinase (Cre-Vektor: sc-418923) nach der Etablierung stabiler Knockout-Zelllinien ermöglicht
- Nach der Transfektion kann die Effizienz des Gen-Knockouts per Western Blot oder histologisch mit folgendem Antikörper überprüft werden: PP1γ: sc-515943
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
PP1γ CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) | sc-401476 | 20 µg | $397.00 |
Übersicht
PPP1CC kodiert die Proteinphosphatase 1 Gamma (PP1γ), eine katalytische Serin/Threonin-Phosphatase, die mit unterschiedlichen regulatorischen Untereinheiten zusammenwirkt, um zentrale Substrate zu dephosphorylieren sowie Substratspezifität und subzelluläre Lokalisation zu steuern. PP1γ trägt zu wichtigen Signal- und Zellzyklus-Kontrollnetzwerken bei, indem sie Phosphorylierungszustände reguliert, die an der Mitoseprogression, der Chromosomentrennung und der Zytoskelettdynamik beteiligt sind; außerdem wird sie mit der RNA-Prozessierung und zellulären Stressantworten in Verbindung gebracht. Über diese Funktionen beeinflusst PP1γ Signalwege, die Proliferation, Differenzierung und Genomstabilität steuern, wodurch PPP1CC ein relevanter Knotenpunkt für die Untersuchung phosphorylierungsgetriebener Regulationsschaltkreise ist. Eine fehlregulierte PP1-Aktivität wurde mit onkogenem Signaling, neurobiologisch relevanten Mechanismen und weiteren phosphorylierungsabhängigen Krankheitsprozessen assoziiert, was mechanistische Untersuchungen in humanen Zellmodellen unterstützt.
Das PP1γ CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des PPP1CC-Gens in human-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des PPP1CC-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.
Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von PPP1CC nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die PP1γ-Proteinexpression aufheben.
Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von PPP1CC-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der PP1γ-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.
Hauptmerkmale
- sgRNAs, die auf PPP1CC-Exone abzielen, die für die PP1γ-Funktion entscheidend sind
Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
Pool von Plasmiden, die auf mehrere PPP1CC-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion
Designvarianten
CRISPRs +/- HDRs
- gRNAs, die vom PP1γ CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) und vom PP1γ CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des PPP1CC-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das PP1γ HDR-Plasmid (h) und PP1γ HDR-Plasmid (h2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von PPP1CC-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten PPP1CC-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.