Not CRISPR data: the image illustrates antibody quality for visualizing CRISPR experiment results.
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Plásmido Doble Nickase (h) PP1α: sc-400318-NIC
- Especies Diana: human
- 20 µg de plásmido de ADN purificado listo para la trasfección; suficiente para 20 transfecciones máximo
- El Plásmido Double Nickase (h)PP1α consisten en un par de plásmidos cada uno codificando una nucleasa Cas9 mutada D10A y una guia de ARN de 20 nucleótidos (gRNA) diseñados para una mayor especificidad que el homologo CRISPR/Cas9 KO
- Las secuencias de gRNA tienen una diferencia de unas 20 pb para permitir un corte doble mediado por Cas9 en el ADN que imita el doble corte
- Uno de los plásmidos contiene el gen de resistencia a puromicina para la selección y el otro el marcado GFP para confirmar visualmente la transfección
- El plásmido de doble nickasa PP1α (h) y el plásmido de doble nickasa PP1α (h2) codifican diseños distintos de pares de gRNA dirigidos a PPP1CA. Puede que esté disponible uno o ambos diseños
- Tras la transfección, la eficacia del knockout puede comprobarse mediante WB, IF ó IHC utilzando el anticuerpo: PP1 Anticuerpo (E-9): sc-7482
Información sobre pedidos
| Nombre del producto | Número de catálogo | UNIDAD | Precio | CANTIDAD | Favoritos | |
Plásmido Doble Nickase (h) PP1α | sc-400318-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plásmido Doble Nickase (h2) PP1α | sc-400318-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
PPP1CA codifica la isoforma alfa de la subunidad catalítica de la fosfatasa de proteínas 1 (PP1α), una fosfatasa principal de serina/treonina que revierte eventos de fosforilación en diversos programas celulares. La actividad de PP1α es dirigida por subunidades reguladoras para controlar el metabolismo del glucógeno, la progresión del ciclo celular, la dinámica de la cromatina y la organización del citoesqueleto, contrarrestando la señalización impulsada por quinasas. Mediante la desfosforilación de sustratos clave, PPP1CA ayuda a coordinar las respuestas al daño del ADN, la salida de la mitosis y la regulación transcripcional. La desregulación de la señalización de PP1 y las interacciones alteradas entre la fosfatasa y sus reguladores se han vinculado con proliferación aberrante y señalización de estrés observadas en múltiples estados celulares asociados a enfermedad, lo que respalda su estudio en modelos mecanísticos centrados en vías.
PP1α El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus PPP1CA en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de PPP1CA. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de PPP1CA. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.
Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con PPP1CA alterado.
Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.