PON1 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-402701-ACT

A PON1 (paraoxonase 1) humana é uma esterase/lactonase dependente de cálcio, predominantemente associada à HDL no plasma, onde contribui para a desintoxicação de organofosfatos e para a hidrólise de lipídios oxidados. Ao limitar produtos da peroxidação lipídica e ao modificar lactonas bioativas, a PON1 se conecta a respostas ao estresse oxidativo, ao remodelamento de lipoproteínas e à sinalização inflamatória relacionada à homeostase vascular. Variações na expressão e na atividade enzimática da PON1 têm sido associadas ao risco cardiometabólico, a processos ateroscleróticos e à suscetibilidade à exposição a xenobióticos, sendo frequentemente estudadas em conjunto com outras vias antioxidantes e de manejo de lipídios. Essas propriedades tornam a PON1 um alvo útil para estudos mecanísticos da função da HDL, da biologia redox e de interações gene–ambiente em modelos celulares humanos.

PON1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de PON1 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

PON1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus PON1 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição PON1, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de PON1. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus PON1 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de PON1 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via PON1 em células tumorais com expressão de PON1 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.