Plásmido CRISPR de Activación (h) POMT2: sc-409912-ACT

POMT2 (O-manósiltransferasa de proteínas 2) es una glicosiltransferasa residente del retículo endoplásmico que, junto con POMT1, cataliza el paso inicial de la O-manósilación de proteínas. Esta modificación es esencial para la maduración y la función de múltiples glicoproteínas de membrana y secretadas, en particular α-distroglicano, influyendo así en las interacciones con la matriz extracelular, la integridad de la membrana basal y el desarrollo muscular y neuronal. La actividad de POMT2 se integra con procesos de glicosilación y de control de calidad de la vía secretora que moldean la adhesión celular, la migración y la arquitectura tisular. La alteración de la función de POMT2 se asocia con distroglicanopatías y fenotipos neuromusculares y del neurodesarrollo relacionados, lo que la convierte en una diana relevante para estudios mecanísticos del procesamiento de glicoproteínas y de la señalización mediada por distroglicano.

POMT2 El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de POMT2 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

POMT2 El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus POMT2 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional POMT2, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de POMT2. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo POMT2 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de POMT2 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía POMT2 en células tumorales con expresión de POMT2 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.