POMC Plásmido CRISPR/Cas9 KO (r): sc-437377

Descripción general

La proopiomelanocortina (POMC) es un prohormona neuroendocrina precursora que se procesa proteolíticamente en múltiples péptidos bioactivos, incluidos la ACTH y las melanocortinas, que coordinan la señalización del eje del estrés, el balance energético, la pigmentación y la nocicepción. En las vías hipotalámicas e hipofisarias de la rata, los péptidos derivados de POMC actúan a través de receptores de melanocortina e integran señales nutricionales y hormonales para regular la conducta alimentaria y la homeostasis metabólica. La expresión de POMC está estrechamente controlada por programas transcripcionales del desarrollo y sensibles a estímulos, y las alteraciones en el procesamiento o la señalización de POMC se han implicado en fenotipos relacionados con la obesidad, respuestas desreguladas del eje HHA y disfunción endocrina. Como nodo central en la biosíntesis de neuropéptidos y en la señalización mediada por GPCR, POMC se utiliza ampliamente para estudiar la identidad de las células neuroendocrinas, la maduración de péptidos y la fisiología sistémica.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO POMC (r) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen en líneas celulares rat. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína POMC.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en para la investigación de la señalización de POMC, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de críticos para la función de POMC
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido POMC CRISPR/Cas9 KO (r) y el plásmido POMC CRISPR/Cas9 KO (r2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus . Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR POMC (r) y el plásmido HDR POMC (r2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.