Plasmide CRISPR/Cas9 KO POMC (h): sc-400592

Présentation

POMC (proopiomélanocortine) code une prohormone sécrétoire qui est traitée par protéolyse en de multiples peptides bioactifs, dont l’ACTH et les hormones stimulantes des mélanocytes, qui coordonnent la signalisation endocrinienne du stress, l’homéostasie énergétique, la pigmentation et la nociception. Dans les cellules corticotropes de l’hypophyse, l’ACTH dérivée de POMC stimule la stéroïdogenèse surrénalienne via les voies des récepteurs mélanocortines, reliant l’activité de l’axe hypothalamo–hypophyso–surrénalien aux réponses métaboliques et immunitaires systémiques. Le processing de POMC dépend du trafic au sein de la voie de sécrétion régulée et des convertases de prohormones, en intégration avec la signalisation AMPc/PKA et les programmes de différenciation neuroendocrinienne. Une dysrégulation ou une perte de fonction de POMC est associée à des troubles de la fonction surrénalienne, à des phénotypes d’obésité et d’hyperphagie, ainsi qu’à une altération de la signalisation mélanocortinergique, aspects pertinents pour la recherche neuroendocrinienne et métabolique.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO POMC (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène POMC dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du POMC, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert POMC à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine POMC.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en POMC pour l'étude de la signalisation de POMC, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de POMC essentiels à la fonction de POMC
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de POMC pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le POMC plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le POMC plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus POMC. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le POMC plasmide HDR (h) et le POMC (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie POMC pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles POMC définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.