POMC CRISPR Activation Plasmid (h): sc-400592-ACT

Das humane POMC-Gen kodiert Proopiomelanocortin, ein neuroendokrines Prohormon, das proteolytisch zu mehreren bioaktiven Peptiden verarbeitet wird, darunter ACTH und Melanozyten-stimulierende Hormone. Diese Peptide signalisieren über Melanocortin-Rezeptoren und regulieren die hypothalamische Kontrolle von Appetit und Energiebilanz, koordinieren die Aktivität der Hypophysen-Nebennierenrinden-Achse und beeinflussen Pigmentierung sowie Stressantworten. Die POMC-Expression und die Peptidverarbeitung sind eng mit cAMP/PKA-gesteuerten Transkriptionsprogrammen und der von Prohormon-Convertasen abhängigen Reifung in sekretorischen Signalwegen verknüpft. Eine Fehlregulation der POMC-Signalwege ist mit Störungen der Energiehomöostase, der Nebennierenfunktion und der Pigmentbiologie assoziiert, was POMC zu einem zentralen Ziel für mechanistische Studien der neuroendokrinen Signalübertragung macht.

POMC Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen POMC-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

POMC Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des POMC-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der POMC-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen POMC-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native POMC-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von POMC-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des POMC-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem POMC-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.