Plasmide CRISPR d'Activation (h) POLR3GL: sc-413599-ACT

Le gène humain **POLR3GL** code une petite sous-unité de l’ARN polymérase III, qui soutient la transcription de courts ARN non codants, notamment les ARNt, l’ARNr 5S et d’autres ARN dépendants de la Pol III, essentiels à la capacité de traduction et à l’homéostasie cellulaire. **POLR3GL** contribue à l’assemblage du complexe Pol III et à l’initiation dépendante du promoteur, reliant ainsi son activité au contrôle de la croissance, à l’adaptation au stress et aux voies de signalisation de l’immunité innée influencées par les ARN dérivés de la Pol III. La dérégulation des programmes transcriptionnels de la Pol III est largement pertinente pour des phénotypes prolifératifs et développementaux, faisant de **POLR3GL** un nœud utile pour étudier comment une production modifiée d’ARN non codants remodèle les réseaux d’expression génique. L’étude de la fonction de **POLR3GL** peut éclairer les mécanismes qui relient l’activité de la Pol III à la régulation transcriptionnelle, aux besoins en synthèse protéique et à des états cellulaires associés aux maladies.

POLR3GL Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de POLR3GL sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

POLR3GL Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus POLR3GL dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription POLR3GL, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de POLR3GL. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus POLR3GL natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de POLR3GL au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie POLR3GL dans les cellules tumorales présentant une expression de POLR3GL silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.