Plasmide CRISPR d'Activation (h) POLR2J1: sc-409187-ACT

POLR2J code une sous-unité de l’ARN polymérase II, l’enzyme centrale responsable de la synthèse des ARNm et de nombreux ARN non codants dans les cellules humaines. POLR2J1 contribue à l’assemblage et au fonctionnement du complexe Pol II et soutient les programmes d’initiation et d’élongation de la transcription qui façonnent l’expression génique globale, la maturation des ARN et les réponses cellulaires aux signaux. Par son rôle dans la machinerie transcriptionnelle basale, POLR2J1 est impliquée dans des voies contrôlant la prolifération, l’adaptation au stress et les états de différenciation, qui dépendent d’un niveau de transcription finement régulé. La dérégulation de facteurs associés à Pol II est fréquemment observée dans le cancer et d’autres troubles de la régulation de l’expression génique, ce qui fait de POLR2J1 un nœud pertinent pour des études mécanistiques de l’homéostasie transcriptionnelle.

POLR2J1 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de POLR2J sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

POLR2J1 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus POLR2J dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription POLR2J, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de POLR2J1. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus POLR2J natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de POLR2J1 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie POLR2J1 dans les cellules tumorales présentant une expression de POLR2J silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.