Plásmido CRISPR de Activación (h) POLR1E: sc-407602-ACT

POLR1E codifica una subunidad central de la ARN polimerasa I, un complejo multiproteico responsable de transcribir los precursores de ARN ribosomal que inician la biogénesis de los ribosomas en el nucléolo. Al apoyar la síntesis y el procesamiento del pre-ARNr, POLR1E contribuye al control del crecimiento celular, a la capacidad de proteostasis y a las vías de señalización del estrés nucleolar que conectan la producción de ribosomas con la regulación del ciclo celular. La alteración de la función de la ARN polimerasa I puede desestabilizar la homeostasis de la síntesis proteica y activar respuestas de estrés como puntos de control asociados a p53, lo que hace que POLR1E sea relevante para estudios de proliferación, diferenciación y estabilidad genómica. La evidencia genética vincula la disfunción de POLR1E con fenotipos de ribosomopatía humana y trastornos del desarrollo, lo que subraya su importancia en tejidos con alta demanda biosintética.

POLR1E El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de POLR1E sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

POLR1E El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus POLR1E en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional POLR1E, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de POLR1E. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo POLR1E y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de POLR1E en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía POLR1E en células tumorales con expresión de POLR1E silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.