Plásmido Doble Nickase (h) POFUT1: sc-406276-NIC
- Especies Diana: human
- 20 µg de plásmido de ADN purificado listo para la trasfección; suficiente para 20 transfecciones máximo
- El Plásmido Double Nickase (h)POFUT1 consisten en un par de plásmidos cada uno codificando una nucleasa Cas9 mutada D10A y una guia de ARN de 20 nucleótidos (gRNA) diseñados para una mayor especificidad que el homologo CRISPR/Cas9 KO
- Las secuencias de gRNA tienen una diferencia de unas 20 pb para permitir un corte doble mediado por Cas9 en el ADN que imita el doble corte
- Uno de los plásmidos contiene el gen de resistencia a puromicina para la selección y el otro el marcado GFP para confirmar visualmente la transfección
- El plásmido de doble nickasa POFUT1 (h) y el plásmido de doble nickasa POFUT1 (h2) codifican diseños distintos de pares de gRNA dirigidos a POFUT1. Puede que esté disponible uno o ambos diseños
- Tras la transfección, la eficacia del knockout puede comprobarse mediante WB, IF ó IHC utilzando el anticuerpo: POFUT1 Anticuerpo (F-7): sc-271026
Información sobre pedidos
| Nombre del producto | Número de catálogo | UNIDAD | Precio | CANTIDAD | Favoritos | |
Plásmido Doble Nickase (h) POFUT1 | sc-406276-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plásmido Doble Nickase (h2) POFUT1 | sc-406276-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
POFUT1 codifica la proteína O‑fucosiltransferasa 1, una glicosiltransferasa residente del retículo endoplásmico que cataliza la O‑fucosilación de repeticiones tipo factor de crecimiento epidérmico (EGF) en determinadas proteínas secretadas y de membrana. Esta modificación es fundamental para el plegamiento, el tráfico y la señalización dependiente de ligando de los receptores Notch y de otras proteínas que contienen repeticiones EGF, vinculando la actividad de POFUT1 con la regulación de la vía Notch y con las decisiones de destino celular. La alteración de la función de POFUT1 puede perturbar el control de calidad de las glicoproteínas y la intensidad de la señal de Notch, procesos implicados en fenotipos del desarrollo y en la desregulación de la diferenciación asociada a enfermedades. Por ello, POFUT1 se estudia ampliamente en contextos como la homeostasis epitelial, la especificación de linajes hematopoyéticos y neurales, y las redes de señalización dependientes de la glicosilación.
POFUT1 El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus POFUT1 en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de POFUT1. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de POFUT1. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.
Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con POFUT1 alterado.
Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.