Podocalyxin-like 1 Double Nickase Plasmid (h): sc-400317-NIC
- Zielspezies: human
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das Podocalyxin-like 1 Double Nickase Plasmid (h) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- Podocalyxin-like 1 Double-Nickase-Plasmid (h) und Podocalyxin-like 1 Double-Nickase-Plasmid (h2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf PODXL abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
- Nach der Transfektion kann die Effizienz des Gen-Knockouts per Western Blot oder histologisch mit folgendem Antikörper überprüft werden: Podocalyxin-like 1: sc-23903
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
Podocalyxin-like 1 Double Nickase Plasmid (h) | sc-400317-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Podocalyxin-like 1 Double Nickase Plasmid (h2) | sc-400317-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
PODXL kodiert Podocalyxin-like 1, ein stark glykosyliertes Sialomucin, das an der apikalen Oberfläche von Epithelzellen sowie in spezialisierten Strukturen wie den Fußfortsätzen von Podozyten lokalisiert ist. Über Interaktionen mit ERM-Proteinen und Gerüstproteinen einschließlich NHERF verbindet PODXL die Plasmamembran mit dem Aktinzytoskelett, um Zellpolarität, Adhäsion und Motilität zu regulieren, und kann die Signalübertragung von Rho-Familien-GTPasen sowie das zytoskelettale Remodeling beeinflussen. Podocalyxin-like 1 trägt zur Aufrechterhaltung von Barriereeigenschaften und zu morphogenetischen Prozessen bei, indem es Zell-Zell- und Zell-Matrix-Interaktionen moduliert. Eine veränderte PODXL-Expression oder -Lokalisation wurde in mehreren Krankheitskontexten mit Änderungen der Gewebearchitektur und invasiven Phänotypen in Verbindung gebracht, was seine Nutzung als Marker und mechanistischer Knotenpunkt in Studien zur Epithelorganisation und zum Verhalten von Tumorzellen unterstützt.
Podocalyxin-like 1 Das Double-Nickase-Plasmid (h) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des PODXL-Lokus in human-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von PODXL abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die PODXL-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit PODXL-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.