Podocalyxin-like 1 CRISPR Activation Plasmid (h): sc-400317-ACT

PODXL kodiert Podocalyxin-like 1, ein stark glykosyliertes Sialomucin der CD34-Familie, das an der apikalen Oberfläche polarisierter Epithelien und des vaskulären Endothels lokalisiert ist. Über seine antiadhäsiven Eigenschaften und Interaktionen mit NHERF/Ezrin-Aktin-Linkern trägt PODXL zur Zellform, zur Lumenbildung und zur Regulation des Gleichgewichts zwischen Adhäsion und Motilität bei und beeinflusst damit die Zytoskelettorganisation sowie Programme der Epithelpolarität. Podocalyxin-like 1 wurde mit Prozessen im Zusammenhang mit epithelial-mesenchymaler Transition (EMT), Migration und Invasion in Verbindung gebracht, und eine veränderte Expression wird in Studien zur Tumorprogression und zu metastatischen Phänotypen häufig untersucht. In der Niere ist PODXL ein wichtiger Marker für Podozyten und relevant für die Integrität der glomerulären Barriere sowie für die Morphodynamik der Podozyten.

Podocalyxin-like 1 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen PODXL-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

Podocalyxin-like 1 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des PODXL-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der PODXL-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen Podocalyxin-like 1-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native PODXL-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von Podocalyxin-like 1-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des Podocalyxin-like 1-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem PODXL-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.