PNUTS Plásmido CRISPR/Cas9 KO (m): sc-424580
- Especies Diana: mouse
- 20 µg de plásmido de ADN purificado listo para la trasfección; suficiente para 20 transfecciones máximo
- PNUTS El plásmido CRISPR/Cas9 Knockout (KO) (m) es un conjunto de plásmidos, cada uno de los cuales codifica la nucleasa Cas9 y un ARN guía (gRNA) de 20 nt específico para el objetivo, diseñado para lograr la máxima eficiencia de knockout utilizando secuencias derivadas de la biblioteca GeCKO v2
- Las secuencias de gRNA dirigen a Cas9 para que induzca roturas de doble cadena (DSB) específicas en el locus genómico PNUTS, lo que da lugar a la inactivación del gen mediante unión de extremos no homólogos (NHEJ)
- Los genes de resistencia a la puromicina y RFP están flanqueados por sitios LoxP, lo que permite la eliminación de los marcadores de selección mediante la recombinasa Cre (Vector Cre: sc-418923) tras el establecimiento de líneas celulares knockout estables
- Tras la transfección, la eficacia del knockout puede comprobarse mediante WB, IF ó IHC utilzando el anticuerpo: PNUTS Anticuerpo (F-8): sc-271681
Información sobre pedidos
| Nombre del producto | Número de catálogo | UNIDAD | Precio | CANTIDAD | Favoritos | |
PNUTS Plásmido CRISPR/Cas9 KO (m) | sc-424580 | 20 µg | $397.00 |
Descripción general
El gen murino Ppp1r10 codifica PNUTS (subunidad reguladora 10 de la fosfatasa de proteínas 1), un andamio nuclear que dirige PP1 hacia la cromatina y complejos asociados al ARN para coordinar el control de la expresión génica dependiente de la fosforilación. PNUTS participa en la regulación de la transcripción, la señalización de la respuesta al daño en el ADN y el control de los puntos de control del ciclo celular, influyendo en procesos como la gestión del estrés replicativo y el mantenimiento de la estabilidad genómica. Mediante interacciones con factores implicados en la organización de la cromatina y el procesamiento de ARN, PNUTS ayuda a acoplar la dinámica de fosforilación con la elongación transcripcional y la biogénesis de ARN. La desregulación de la señalización PP1–PNUTS se ha asociado con programas proliferativos alterados y fenotipos de inestabilidad genómica relevantes para estudios mecanísticos de vías asociadas al cáncer y para la neurobiología.
El plásmido CRISPR/Cas9 KO PNUTS (m) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen Ppp1r10 en líneas celulares mouse. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del Ppp1r10 junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.
El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de Ppp1r10 tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína PNUTS.
Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en Ppp1r10 para la investigación de la señalización de PNUTS, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.
Características principales
- sgRNA dirigidos a los exones de Ppp1r10 críticos para la función de PNUTS
Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de Ppp1r10 para mejorar la eficiencia del knockout
Compatible con la administración mediante transfección
Variantes de diseño
CRISPRs +/- HDRs
- Los gRNA codificados por el plásmido PNUTS CRISPR/Cas9 KO (m) y el plásmido PNUTS CRISPR/Cas9 KO (m2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus Ppp1r10. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR PNUTS (m) y el plásmido HDR PNUTS (m2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología Ppp1r10 para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana Ppp1r10 definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.