PNPase Plásmido CRISPR/Cas9 KO (h): sc-404406

Descripción general

PNPT1 codifica la polirribonucleótido nucleotidiltransferasa 1 (PNPasa), una enzima mitocondrial de procesamiento de ARN que participa en la actividad exorribonucleasa 3′–5′ y en la vigilancia del ARN dentro del espacio intermembrana. La PNPasa contribuye a la expresión génica mitocondrial al regular la importación y el recambio de ARN pequeños y al modular la función del mitorribosoma, influyendo así en la capacidad de fosforilación oxidativa y en la bioenergética celular. La alteración de PNPT1 se ha asociado con fenotipos de disfunción mitocondrial, incluidos defectos en la actividad de la cadena respiratoria y respuestas al estrés modificadas vinculadas a un metabolismo mitocondrial del ARN deteriorado. Como resultado, PNPT1 se estudia con frecuencia en vías que conectan la homeostasis del ARN mitocondrial, la señalización inmunitaria innata desencadenada por especies de ARN aberrantes y mecanismos relevantes para enfermedades del neurodesarrollo y trastornos metabólicos.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO PNPase (h) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen PNPT1 en líneas celulares human. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del PNPT1 junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de PNPT1 tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína PNPase.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en PNPT1 para la investigación de la señalización de PNPase, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de PNPT1 críticos para la función de PNPase
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de PNPT1 para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido PNPase CRISPR/Cas9 KO (h) y el plásmido PNPase CRISPR/Cas9 KO (h2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus PNPT1. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR PNPase (h) y el plásmido HDR PNPase (h2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología PNPT1 para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana PNPT1 definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.