PNPase Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-404406

Panoramica

PNPT1 codifica la poliribonucleotide nucleotidiltransferasi 1 (PNPasi), un enzima mitocondriale coinvolto nella processazione dell’RNA che svolge attività esoribonucleasica 3′–5′ e funzioni di sorveglianza dell’RNA nello spazio intermembrana. La PNPasi contribuisce all’espressione genica mitocondriale regolando l’importazione e il turnover di piccoli RNA e modulando la funzione del mitoribosoma, influenzando così la capacità di fosforilazione ossidativa e la bioenergetica cellulare. L’alterazione di PNPT1 è stata associata a fenotipi di disfunzione mitocondriale, inclusi difetti nell’attività della catena respiratoria e risposte allo stress modificate legate a un metabolismo dell’RNA mitocondriale compromesso. Di conseguenza, PNPT1 è spesso studiato nei percorsi che collegano l’omeostasi dell’RNA mitocondriale, la segnalazione dell’immunità innata innescata da specie di RNA aberranti e meccanismi rilevanti per malattie neuroevolutive e metaboliche.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO PNPase (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene PNPT1 in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del PNPT1 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto PNPT1 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina PNPase.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di PNPT1 per lo studio della segnalazione di PNPase, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni PNPT1 critici per la funzione di PNPase
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di PNPT1 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal PNPase CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal PNPase CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus PNPT1. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal PNPase Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR PNPase (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia PNPT1 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio PNPT1 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.