PMPCB Plásmido CRISPR/Cas9 KO (h): sc-405207

Descripción general

PMPCB codifica la subunidad beta de la peptidasa de procesamiento mitocondrial, un componente central del complejo MPP heterodimérico que escinde las presecuencias de direccionamiento N‑terminal de proteínas codificadas en el núcleo tras su importación a la matriz mitocondrial. Al permitir la maduración de enzimas de la fosforilación oxidativa y del metabolismo, PMPCB contribuye a la proteostasis mitocondrial, a la homeostasis bioenergética y a respuestas al estrés vinculadas al control de calidad mitocondrial. La alteración del procesamiento de presecuencias mitocondriales puede deteriorar la función de la cadena respiratoria, aumentar el estrés proteotóxico y modificar las señales de apoptosis y mitofagia. La disfunción de PMPCB y las alteraciones en el procesamiento de proteínas mitocondriales se han asociado con fenotipos del neurodesarrollo y con mecanismos de enfermedad mitocondrial, por lo que resulta relevante para estudios sobre metabolismo energético y disfunción de orgánulos.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO PMPCB (h) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen PMPCB en líneas celulares human. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del PMPCB junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de PMPCB tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína PMPCB.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en PMPCB para la investigación de la señalización de PMPCB, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de PMPCB críticos para la función de PMPCB
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de PMPCB para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido PMPCB CRISPR/Cas9 KO (h) y el plásmido PMPCB CRISPR/Cas9 KO (h2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus PMPCB. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR PMPCB (h) y el plásmido HDR PMPCB (h2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología PMPCB para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana PMPCB definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.