Plásmido CRISPR de Activación (h) PML: sc-400145-ACT

El gen humano PML codifica la proteína de la leucemia promielocítica, un organizador clave de los cuerpos nucleares PML que coordinan la regulación transcripcional, las respuestas al daño del ADN, la apoptosis y la defensa antiviral intrínseca. PML influye en las redes de SUMOilación postraduccional y se conecta con vías como la señalización de p53, los programas de genes estimulados por interferón y la remodelación de la cromatina para moldear decisiones de destino celular bajo estrés. La disrupción o regulación alterada de la dinámica de los cuerpos nucleares PML se ha vinculado con la transformación oncogénica y una vigilancia genómica defectuosa, con especial relevancia en la biología de las neoplasias hematológicas y en modelos más amplios de cáncer. Como proteína andamiaje con efectos dependientes del contexto, PML constituye un nodo abordable para diseccionar la compartimentalización nuclear y los circuitos de respuesta al estrés en células humanas.

PML El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de PML sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

PML El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus PML en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional PML, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de PML. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo PML y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de PML en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía PML en células tumorales con expresión de PML silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.