Plásmido CRISPR de Activación (h) PLP: sc-401663-ACT

PLP1 codifica la proteína proteolipídica 1 (PLP), un componente estructural principal de la mielina compacta en el sistema nervioso central, que sostiene la arquitectura de la membrana de los oligodendrocitos y favorece una conducción axonal eficiente. PLP participa en el ensamblaje y el mantenimiento de la vaina de mielina mediante la organización de membranas ricas en lípidos y las vías de biogénesis de la mielina que regulan la integridad de la sustancia blanca. Las alteraciones en la dosis o en la secuencia de PLP1 perturban la mielinización y la función de los oligodendrocitos, y se asocian con leucodistrofias hipomielinizantes hereditarias y fenotipos neurodel desarrollo y neurodegenerativos relacionados. Por ello, PLP1 se estudia con frecuencia en modelos de diferenciación de oligodendrocitos, interacciones axón–glía y mecanismos de estabilidad de la mielina.

PLP El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de PLP1 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

PLP El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus PLP1 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional PLP1, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de PLP. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo PLP1 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de PLP en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía PLP en células tumorales con expresión de PLP1 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.