Plásmido CRISPR de Activación (h) PLIC-1: sc-408872-ACT

UBQLN1 codifica ubiquilina-1 (PLIC-1), un adaptador con dominios tipo ubiquitina y asociado a ubiquitina que acopla sustratos poliubiquitinados al proteasoma 26S y ayuda a mantener la homeostasis proteica. PLIC-1 participa en la proteólisis dependiente de ubiquitina, la degradación asociada al retículo endoplásmico (ERAD) y vías de proteostasis sensibles al estrés, influyendo en el recambio de proteínas mal plegadas o propensas a la agregación. Por sus funciones en el control de calidad proteico y el tráfico intracelular, UBQLN1 se estudia con frecuencia en el contexto de la agregación proteica neurodegenerativa y fenotipos celulares asociados al estrés. La alteración de la función o la expresión de UBQLN1 también se ha vinculado a una proteostasis desregulada en entornos de señalización relevantes para el cáncer y la inflamación, lo que respalda su uso en investigaciones centradas en vías y mecanismos.

PLIC-1 El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de UBQLN1 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

PLIC-1 El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus UBQLN1 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional UBQLN1, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de PLIC-1. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo UBQLN1 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de PLIC-1 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía PLIC-1 en células tumorales con expresión de UBQLN1 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.