plexin-B1 Particelle di Attivazione Lentivirale (h): sc-401840-LAC

PLXNB1 codifica la plexina-B1, un recettore transmembrana a singolo passaggio per le semaforine di classe 4 che regola il rimodellamento del citoscheletro, la migrazione cellulare, l’adesione e la guida assonale. Attraverso interazioni con le GTPasi della famiglia Rho e intermedi di segnalazione come MET ed ERBB2, la plexina-B1 collega i segnali extracellulari delle semaforine a cambiamenti nella dinamica dell’actina e nei programmi di motilità cellulare. L’attività della plexina-B1 influenza i processi di patterning angiogenico e neuronale e può modulare il comportamento invasivo e le vie associate alla transizione epitelio-mesenchimale in modelli cellulari rilevanti per la malattia. Alterazioni dell’espressione o della segnalazione di PLXNB1 sono state associate a fenotipi di guida e migrazione deregolati osservati in contesti di neurosviluppo e nella ricerca in biologia del cancro.

Le particelle di attivazione lentivirale plexin-B1 (h) rispondono a questa esigenza incapsulando il sistema completo di attivazione trascrizionale del mediatore di attivazione sinergica (SAM) in particelle lentivirali ad alto titolo pronte per la trasduzione, consentendo un'efficiente sovraregolazione di PLXNB1 in una gamma più ampia di tipi di cellule umane.

Le particelle di attivazione lentivirale plexin-B1 (h) veicolano tutti i componenti funzionali del sistema del mediatore di attivazione sinergica (SAM) tramite trasduzione lentivirale. Il sistema comprende tre preparati di particelle co-trasdotti nelle cellule bersaglio: uno che codifica per dCas9 cataliticamente inattivo (mutazioni D10A e N863A) fuso al dominio di transattivazione VP64 con un gene di resistenza alla blasticidina; una che codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1 con un gene di resistenza all'igromicina; e una che codifica un sgRNA di 20 nt specifico per il bersaglio fuso a due aptameri di RNA MS2 con un gene di resistenza alla puromicina. A seguito della trasduzione lentivirale e dell'integrazione genomica dei cassetti di espressione, i componenti del SAM vengono espressi in modo stabile e si assemblano nel locus bersaglio all'interno della regione promotrice prossimale a monte del sito di inizio della trascrizione PLXNB1, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo cooperativo per reclutare il machinery trascrizionale endogeno e guidare una sovraregolazione sostenuta dell'espressione endogena di plexin-B1. L'uso di dCas9 inattivo nei confronti delle nucleasi evita l'introduzione di rotture del DNA a doppio filamento e preserva il locus genomico nativo PLXNB1 e l'architettura regolatoria.

Il formato lentivirale offre diversi vantaggi pratici: l'integrazione genomica stabile supporta l'attivazione ereditaria attraverso le divisioni cellulari; le preparazioni di particelle ad alto titolo eliminano la necessità di una produzione virale interna; e la compatibilità con tipi di cellule primarie, non in divisione e resistenti alla trasfezione amplia l'accessibilità sperimentale. Il successo della trasduzione può essere confermato e potenziato attraverso una selezione antibiotica tripla utilizzando puromicina, igromicina e blasticidina.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.