plexin-B1 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h): sc-401840

Übersicht

PLXNB1 kodiert Plexin-B1, einen einzelpassigen transmembranen Rezeptor für Semaphorine der Klasse 4, der die Umgestaltung des Zytoskeletts und die gerichtete Zellbewegung koordiniert. Über die Kopplung an Signalmodule kleiner GTPasen, einschließlich Signalwegen der Rho-Familie und Ras-verwandter Eingänge, reguliert Plexin-B1 die Aktindynamik, den Turnover von Zelladhäsionen und die Neuritenlenkung. Die Aktivität von Plexin-B1 überschneidet sich mit Rezeptor-Tyrosinkinasen- und integrinassoziierter Signalübertragung und beeinflusst so Migration und invasives Verhalten in unterschiedlichen Zellkontexten. Eine fehlregulierte PLXNB1-Expression oder -Signalgebung wurde sowohl mit neuroentwicklungsbezogenen Prozessen als auch mit krebsassoziierten Phänotypen wie veränderter Motilität und metastatischem Potenzial in Verbindung gebracht, was PLXNB1 als mechanistischen Knotenpunkt für Pathway-Studien unterstützt.

Das plexin-B1 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des PLXNB1-Gens in human-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des PLXNB1-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von PLXNB1 nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die plexin-B1-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von PLXNB1-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der plexin-B1-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf PLXNB1-Exone abzielen, die für die plexin-B1-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere PLXNB1-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom plexin-B1 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) und vom plexin-B1 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des PLXNB1-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das plexin-B1 HDR-Plasmid (h) und plexin-B1 HDR-Plasmid (h2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von PLXNB1-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten PLXNB1-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.