Plasmide CRISPR/Cas9 KO plexin-B1 (h): sc-401840

Présentation

PLXNB1 code la plexine‑B1, un récepteur transmembranaire à passage unique des sémaphorines de classe 4, qui coordonne le remodelage du cytosquelette et le mouvement cellulaire dirigé. En se couplant à des modules de signalisation des petites GTPases, notamment les voies de la famille Rho et des apports liés à Ras, la plexine‑B1 régule la dynamique de l’actine, le renouvellement des adhérences et le guidage des neurites. L’activité de la plexine‑B1 s’articule avec la signalisation des récepteurs à activité tyrosine kinase et des voies associées aux intégrines, influençant la migration et le comportement invasif dans de nombreux contextes cellulaires. Une expression ou une signalisation dérégulée de PLXNB1 a été impliquée dans des processus de neurodéveloppement ainsi que dans des phénotypes associés au cancer, tels qu’une motilité modifiée et un potentiel métastatique accru, ce qui étaye son utilisation comme nœud mécanistique dans des études de voies de signalisation.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO plexin-B1 (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène PLXNB1 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du PLXNB1, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert PLXNB1 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine plexin-B1.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en PLXNB1 pour l'étude de la signalisation de plexin-B1, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de PLXNB1 essentiels à la fonction de plexin-B1
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de PLXNB1 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le plexin-B1 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le plexin-B1 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus PLXNB1. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le plexin-B1 plasmide HDR (h) et le plexin-B1 (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie PLXNB1 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles PLXNB1 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.