Plásmido CRISPR de Activación (h) plexin-B1: sc-401840-ACT

PLXNB1 codifica plexina-B1, un receptor transmembrana para las semaforinas de clase 4 que coordina señales dependientes de contacto para regular la remodelación del citoesqueleto, la migración celular direccional y la guía axonal. La plexina-B1 integra señales a través de las GTPasas de la familia Rho y sus efectores asociados para influir en la dinámica de actina, el recambio de adhesiones y los programas de polaridad celular, con efectos posteriores sobre el patrón tisular y la organización de barreras. En biología humana, la alteración de la expresión o la señalización de PLXNB1 se ha vinculado con motilidad desregulada y comportamiento invasivo en modelos de cáncer, y con procesos del neurodesarrollo en los que las vías semaforina–plexina moldean la conectividad neuronal. Estas características hacen de la plexina-B1 un nodo útil para estudiar la señalización por semaforinas, la remodelación ligada a Rho/ROCK y los cambios dependientes del contexto en las interacciones célula–célula y célula–matriz.

plexin-B1 El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de PLXNB1 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

plexin-B1 El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus PLXNB1 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional PLXNB1, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de plexin-B1. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo PLXNB1 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de plexin-B1 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía plexin-B1 en células tumorales con expresión de PLXNB1 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.