PLC γ2 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-400451-ACT

PLCG2 codifica a fosfolipase C gama 2 (PLCγ2), uma enzima de transdução de sinal que hidrolisa PIP2 para gerar IP3 e DAG, desencadeando a mobilização intracelular de Ca2+ e a ativação da proteína quinase C. A PLCγ2 atua a jusante da sinalização de imunorreceptores e de receptores Fc e integra sinais provenientes de vias do receptor de células B, de receptores da imunidade inata e de redes de tirosina quinases para regular proliferação, diferenciação, produção de citocinas e respostas de fagócitos. Na biologia humana, alterações na atividade de PLCG2 têm sido associadas à desregulação imune e a fenótipos inflamatórios, e ela é amplamente estudada em células hematopoéticas, nas quais programas de sinalização dependentes de cálcio moldam o destino das células imunes. Essas propriedades tornam PLCG2 um nó útil para dissecar circuitos de sinalização proximais ao receptor, respostas transcricionais e dinâmicas de segundos mensageiros dependentes de estímulo.

PLC γ2 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de PLCG2 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

PLC γ2 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus PLCG2 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição PLCG2, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de PLC γ2. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus PLCG2 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de PLC γ2 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via PLC γ2 em células tumorais com expressão de PLCG2 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.