Partículas Lentivirales de Activación (h) PLC γ1: sc-400472-LAC

PLCG1 codifica la fosfolipasa C gamma 1 (PLCγ1), una enzima de señalización proximal al receptor que se activa aguas abajo de receptores tirosina quinasa y de determinados receptores inmunitarios mediante interacciones mediadas por SH2/SH3 y por fosforilación. PLCγ1 hidroliza PIP2 para generar IP3 y DAG, iniciando la movilización intracelular de Ca2+ y la activación de la proteína quinasa C, que coordinan la remodelación del citoesqueleto, la migración y programas transcripcionales. Este nodo de señalización se interconecta con las vías MAPK/ERK y dependientes de PI3K y contribuye a la regulación específica del contexto de la proliferación y la supervivencia. Se han descrito alteraciones de la señalización de PLCG1 y mutaciones en múltiples contextos patológicos, incluidos cánceres y trastornos relacionados con el sistema inmunitario, lo que lo convierte en un objetivo valioso para estudios mecanísticos de la transducción de señales impulsada por receptores.

Las partículas de activación lentiviral PLC γ1 (h) responden a esta necesidad al empaquetar el sistema completo de activación transcripcional del mediador de activación sinérgica (SAM) en partículas lentivirales de alto título listas para la transducción, lo que permite una regulación al alza eficiente de PLCG1 en una gama más amplia de tipos de células humanas.

Las partículas de activación lentiviral PLC γ1 (h) suministran todos los componentes funcionales del sistema mediador de activación sinérgica (SAM) a través de la transducción lentiviral. El sistema comprende tres preparaciones de partículas cotransducidas en las células diana: una que codifica dCas9 catalíticamente inactivo (mutaciones D10A y N863A) fusionado al dominio de transactivación VP64 con un gen de resistencia a la blasticidina; otra que codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1 con un gen de resistencia a la higromicina; y otra que codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 con un gen de resistencia a la puromicina. Tras la transducción lentiviral y la integración genómica de los casetes de expresión, los componentes del SAM se expresan de forma estable y se ensamblan en el locus diana dentro de la región promotora proximal, aguas arriba del sitio de inicio de la transcripción PLCG1, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma cooperativa para reclutar la maquinaria transcripcional endógena e impulsar la regulación al alza sostenida de la expresión endógena de PLC γ1. El uso de dCas9 inactivo frente a nucleasas evita la introducción de roturas de ADN de doble cadena y preserva el locus genómico nativo PLCG1 y la arquitectura reguladora.

El formato lentiviral ofrece varias ventajas prácticas: la integración genómica estable permite la activación hereditaria a lo largo de las divisiones celulares; las preparaciones de partículas de alto título eliminan la necesidad de producir el virus internamente; y la compatibilidad con tipos de células primarias, no divisibles y resistentes a la transfección amplía la accesibilidad experimental. La transducción exitosa puede confirmarse y enriquecerse mediante selección con triple antibiótico utilizando puromicina, higromicina y blasticidina.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.