Plásmido Doble Nickase (h) PLC γ1: sc-400472-NIC

PLCG1 codifica la fosfolipasa Cγ1 (PLCγ1), una enzima de señalización proximal al receptor que hidroliza PIP2 para generar IP3 y diacilglicerol, impulsando la movilización intracelular de Ca2+ y la activación de la proteína quinasa C. PLCγ1 se activa aguas abajo de las tirosina quinasas de receptores y de los receptores inmunitarios, integrando señales que regulan la proliferación, la diferenciación, la remodelación del citoesqueleto y la migración celular. Este eje se interconecta con las vías de señalización PI3K–AKT y MAPK/ERK y modula las respuestas transcripcionales mediante efectores dependientes de Ca2+. La actividad desregulada de PLCG1 se ha implicado en contextos de señalización oncogénica y en la activación anómala de células inmunitarias, lo que respalda su relevancia en estudios mecanísticos de la transducción de señales.

PLC γ1 El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus PLCG1 en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de PLCG1. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de PLCG1. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.

Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con PLCG1 alterado.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.