Not CRISPR data: the image illustrates antibody quality for visualizing CRISPR experiment results.
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PLC δ1 Plásmido CRISPR/Cas9 KO (h): sc-402474
- Especies Diana: human
- 20 µg de plásmido de ADN purificado listo para la trasfección; suficiente para 20 transfecciones máximo
- PLC δ1 El plásmido CRISPR/Cas9 Knockout (KO) (h) es un conjunto de plásmidos, cada uno de los cuales codifica la nucleasa Cas9 y un ARN guía (gRNA) de 20 nt específico para el objetivo, diseñado para lograr la máxima eficiencia de knockout utilizando secuencias derivadas de la biblioteca GeCKO v2
- Las secuencias de gRNA dirigen a Cas9 para que induzca roturas de doble cadena (DSB) específicas en el locus genómico PLC δ1, lo que da lugar a la inactivación del gen mediante unión de extremos no homólogos (NHEJ)
- Los genes de resistencia a la puromicina y RFP están flanqueados por sitios LoxP, lo que permite la eliminación de los marcadores de selección mediante la recombinasa Cre (Vector Cre: sc-418923) tras el establecimiento de líneas celulares knockout estables
- Tras la transfección, la eficacia del knockout puede comprobarse mediante WB, IF ó IHC utilzando el anticuerpo: PLC δ1 Anticuerpo (D-7): sc-393464
Información sobre pedidos
| Nombre del producto | Número de catálogo | UNIDAD | Precio | CANTIDAD | Favoritos | |
PLC δ1 Plásmido CRISPR/Cas9 KO (h) | sc-402474 | 20 µg | $397.00 |
Descripción general
PLCD1 codifica la fosfolipasa C delta 1 (PLCδ1), una enzima específica de fosfoinosítidos que hidroliza PIP2 para generar los segundos mensajeros IP3 y diacilglicerol, conectando la señalización de lípidos de membrana con la liberación intracelular de Ca2+ y la activación de la proteína quinasa C. A través de estos efectos, PLCδ1 contribuye a la regulación de la dinámica del citoesqueleto, la secreción, el tráfico de membranas y la expresión génica dependiente de estímulos en diversos tipos celulares. La actividad de PLCD1 se interseca con redes de señalización acopladas a GPCR y a receptores tirosina quinasa, y puede modular programas de señalización aguas abajo como MAPK y programas transcripcionales dependientes de calcio. La alteración de la señalización de fosfoinosítidos/Ca2+ en la que participa PLCD1 se ha asociado con proliferación, diferenciación y respuestas al estrés desreguladas en múltiples contextos relevantes para la enfermedad, lo que respalda su estudio en modelos de señalización celular y de patología mecanística.
El plásmido CRISPR/Cas9 KO PLC δ1 (h) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen PLCD1 en líneas celulares human. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del PLCD1 junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.
El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de PLCD1 tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína PLC δ1.
Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en PLCD1 para la investigación de la señalización de PLC δ1, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.
Características principales
- sgRNA dirigidos a los exones de PLCD1 críticos para la función de PLC δ1
Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de PLCD1 para mejorar la eficiencia del knockout
Compatible con la administración mediante transfección
Variantes de diseño
CRISPRs +/- HDRs
- Los gRNA codificados por el plásmido PLC δ1 CRISPR/Cas9 KO (h) y el plásmido PLC δ1 CRISPR/Cas9 KO (h2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus PLCD1. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR PLC δ1 (h) y el plásmido HDR PLC δ1 (h2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología PLCD1 para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana PLCD1 definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.