PLC β1 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-401141-ACT

O PLCB1 humano codifica a fosfolipase C β1 (PLCβ1), um efetor-chave a jusante de receptores acoplados à proteína G que conecta a sinalização de Gαq/11 ao metabolismo de fosfoinositídeos. Após a ativação, a PLCβ1 hidrolisa PIP2 para gerar IP3 e diacilglicerol, desencadeando a liberação intracelular de Ca2+ e a ativação de PKC, que influenciam secreção, excitabilidade e programas de transcrição. Esse eixo de sinalização integra-se às vias de MAPK e dependentes de cálcio para moldar respostas de neurônios e células imunes, e alterações na atividade de PLCB1 têm sido associadas a fenótipos neuropsiquiátricos e neurológicos, bem como a desregulação da sinalização celular em contextos relevantes para doenças. Estudar a regulação de PLCB1 ajuda a esclarecer como a dinâmica de segundos mensageiros acionada por receptores controla a expressão gênica a jusante e o estado celular.

PLC β1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de PLCB1 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

PLC β1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus PLCB1 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição PLCB1, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de PLC β1. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus PLCB1 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de PLC β1 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via PLC β1 em células tumorais com expressão de PLCB1 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.