plakophilin 1 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (m): sc-422275

Panoramica

Pkp1 codifica la plakofilina 1, una proteina a ripetizioni armadillo che funge da componente centrale dei desmosomi, collegando le cadherine desmosomiali alle reti di filamenti intermedi per sostenere l’adesione cellula‑cellula degli epiteli e l’integrità dei tessuti. Nel topo, la plakofilina 1 contribuisce all’assemblaggio e alla stabilizzazione dei desmosomi, coordinando il rimodellamento delle giunzioni con l’organizzazione del citoscheletro e la meccanotrasduzione. L’alterazione dell’adesione dipendente da PKP1 influisce sulla formazione della barriera epidermica e sulla resistenza allo stress, processi frequentemente studiati nella biologia della cute e degli epiteli stratificati. Poiché la disfunzione desmosomiale influenza la differenziazione, la risposta alle ferite e l’omeostasi epiteliale, Pkp1 è rilevante per indagare patologie associate all’adesione e reti di segnalazione delle giunzioni.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO plakophilin 1 (m) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene Pkp1 in linee cellulari mouse. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del Pkp1 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto Pkp1 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina plakophilin 1.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di Pkp1 per lo studio della segnalazione di plakophilin 1, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni Pkp1 critici per la funzione di plakophilin 1
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di Pkp1 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal plakophilin 1 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m) e dal plakophilin 1 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus Pkp1. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal plakophilin 1 Plasmide HDR (m) e il plasmide HDR plakophilin 1 (m2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia Pkp1 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio Pkp1 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.