plakophilin 1 Plásmido CRISPR/Cas9 KO (m): sc-422275

Descripción general

Pkp1 codifica la plakofilina 1, una proteína con repeticiones armadillo que actúa como componente central de los desmosomas, enlazando las cadherinas desmosomales con las redes de filamentos intermedios para sostener la adhesión célula–célula en epitelios y la integridad tisular. En el ratón, la plakofilina 1 contribuye al ensamblaje y la estabilización de los desmosomas, coordinando la remodelación de las uniones con la organización del citoesqueleto y la mecanotransducción. La alteración de la adhesión dependiente de PKP1 afecta a la formación de la barrera epidérmica y a la resiliencia frente al estrés, procesos que se estudian con frecuencia en la biología de la piel y de los epitelios estratificados. Dado que la disfunción desmosomal influye en la diferenciación, la respuesta a heridas y la homeostasis epitelial, Pkp1 es relevante para investigar patologías asociadas a la adhesión y redes de señalización de las uniones.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO plakophilin 1 (m) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen Pkp1 en líneas celulares mouse. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del Pkp1 junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de Pkp1 tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína plakophilin 1.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en Pkp1 para la investigación de la señalización de plakophilin 1, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de Pkp1 críticos para la función de plakophilin 1
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de Pkp1 para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido plakophilin 1 CRISPR/Cas9 KO (m) y el plásmido plakophilin 1 CRISPR/Cas9 KO (m2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus Pkp1. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR plakophilin 1 (m) y el plásmido HDR plakophilin 1 (m2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología Pkp1 para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana Pkp1 definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.