Plasmide CRISPR/Cas9 KO Placental lactogen II (m): sc-422277

Présentation

Prl3b1 code la lactogène placentaire II de la souris, une cytokine de la famille prolactine/hormone de croissance, exprimée principalement par les lignages trophoblastiques au cours de la gestation. La lactogène placentaire II soutient les adaptations materno-fœtales en modulant des processus endocriniens et métaboliques, notamment la signalisation via le récepteur de la prolactine (PRLR), avec en aval des programmes transcriptionnels JAK2–STAT5 qui influencent la gestion des nutriments et le remodelage des tissus maternels. Dans le placenta, l’activité de Prl3b1 est liée à la différenciation du trophoblaste et à la régulation de la physiologie maternelle, ce qui en fait une cible pertinente pour étudier le développement placentaire et le dialogue endocrinien. Une signalisation de la lactogène placentaire dérégulée a été associée, dans des systèmes modèles, à une croissance fœtale altérée et à des complications de la grossesse, positionnant Prl3b1 comme un locus utile pour des investigations mécanistiques des dysfonctionnements placentaires.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO Placental lactogen II (m) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène Prl3b1 dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du Prl3b1, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert Prl3b1 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine Placental lactogen II.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en Prl3b1 pour l'étude de la signalisation de Placental lactogen II, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de Prl3b1 essentiels à la fonction de Placental lactogen II
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de Prl3b1 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le Placental lactogen II plasmide CRISPR/Cas9 KO (m) et le Placental lactogen II plasmide CRISPR/Cas9 KO (m2) ciblent des sites distincts au sein du locus Prl3b1. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le Placental lactogen II plasmide HDR (m) et le Placental lactogen II (m2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie Prl3b1 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles Prl3b1 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.