PLAC8 CRISPR Activation Plasmid (h): sc-405093-ACT

PLAC8 (placenta associated 8) kodiert ein kleines, cysteinreiches Protein, das mit der Regulation der zellulären Differenzierung, der epithelial‑mesenchymalen Plastizität sowie der angeborenen, immunbezogenen Signalübertragung in Verbindung gebracht wird. In menschlichen Zellen wurde PLAC8 mit der Modulation von Programmen zur Proliferation und Stressantwort assoziiert, einschließlich Signalwegen, die mit Autophagie, Redox‑Homöostase und Zytoskelett‑Remodellierung verknüpft sind. Eine veränderte PLAC8-Expression wurde in zahlreichen Krankheitskontexten beschrieben, insbesondere bei Krebserkrankungen, wo sie mit Änderungen der Invasivität, metastaseassoziierten Phänotypen und Interaktionen mit dem Tumormikromilieu korreliert. Diese Eigenschaften machen PLAC8 zu einem nützlichen Knotenpunkt für mechanistische Studien zur transkriptionellen Kontrolle, zu Zellzustandsübergängen und zu kontextabhängigen Signalantworten.

PLAC8 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen PLAC8-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

PLAC8 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des PLAC8-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der PLAC8-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen PLAC8-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native PLAC8-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von PLAC8-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des PLAC8-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem PLAC8-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.